HSPA1L rs2227956位点单核苷酸多态性与子痫前期遗传易感性关系(1)
[摘要]目的探讨HSPA1Lrs2227956位点单核苷酸多态性与子痫前期遗传易感性的关系。
方法采用TaqMan探针实时荧光PCR技术，对山东地区汉族女性中800例子痫前期(PE)病人和1000例正常妊娠孕妇的外周血DNA进行扩增，比较两组HSPA1Lrs2227956位点基因型分布和等位基因频率。
结果PE组和正常孕妇组HSPA1Lrs2227956位点的基因型分布和等位基因频率比较差异无统计学意义(P>0.05)。与正常孕妇组比较，轻度PE组、重度PE组以及早发型PE、晚发型PE组HSPA1Lrs2227956位点的基因型分布和等位基因频率差异均无显著性(P>0.05)。
结论HSPA1Lrs2227956位点多态性与PE的遗传易感性没有相关性。
[关键词]先兆子痫;HSPA1L基因;多态性，单核苷酸;疾病遗传易感性
[中图分类号]R714.24;R363.25
[文献标志码]A
[文章编号]2096-5532(2020)01-0026-04
子痫前期(PE)是一种妊娠期特发性疾病，可以伴有多种脏器的功能损害[1]，其发病率在初产妇为3.0%～7.0%，经产妇为0.8%～5.0%，严重威胁着母儿的生命健康[2]。PE的发病机制至今尚未完全阐明，但研究表明其发病与炎症反应、氧化应激、免疫失衡、遗传因素等有关[3-8]。系统性炎症反应和氧化应激状态会诱导热休克蛋白70(HSP70)表达升高[9]。并且，PE病人血清、血浆以及胎盘组织中都有高水平的HSP70表达[10]。已有研究证实，多种基因的单核苷酸多态性(SNPs)与PE发病及遗传易感性具有密切关系[11-12]。本研究选取HSP基因中一个标签位点rs2227956，探讨其多态性与PE遗传易感性的相关性，旨在为PE的临床诊断及治疗提供遗传学依据。现将结果报告如下。
1资料与方法
1.1一般资料
选取800例已经确诊的PE病人作为病例组，1000例足月分娩的正常孕妇作为对照组，两组年龄匹配，且均来源于2016年10月—2018年10月在青岛大学附属医院、烟台毓璜顶医院、滨州医学院附属医院、聊城市人民医院、临沂市人民医院、枣庄市妇幼保健院、菏泽市立医院等山东各地医院产科住院的中国汉族妊娠妇女。PE的诊断标准参照美国“国家高血压教育计划”[13]，分度及分型参考相关文献标准[14-15]。其中轻度PE病人181例，重度PE病人619例;早发型PE病人426例，晚发型PE病人374例。对照组为没有PE病史、足月分娩、产后随访亦未发生PE的正常孕妇。两组孕妇均排除前置胎盘、胎膜早破、先兆流产、辅助生殖、巨大儿及双胎妊娠，均无慢性高血压、心脏病、肾病、糖尿病、甲状腺疾病以及系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎等全身性疾病病史。
两组孕妇临床资料均完整，包括年龄、月经初潮年龄、妊娠次数、流产次数、收缩压、舒张压、入院孕周、分娩孕周、临床症状以及实验室检查指标等，且所有研究对象均签署知情同意书。本研究获青岛大学附属医院伦理委员会批准。
1.2研究方法
采集研究对象外周肘静脉血2mL于EDTA抗凝管中，用试剂盒提取基因组DNA，然后采用TaqMan探针实时荧光PCR技术对HSPA1L基因rs2227956位点多态性进行检测。PCR反应体系包括：20×SNP探针1.25μL，2×PCRMasterMix12.5μL，模板DNA和去除DNA酶水11.25μL，总反应体系共25μL。实验所用探针、引物及MasterMix均购买于美国ABI公司。其中rs2227956位点上游引物序列为5′-AATGGTATTCTCAATGTC-ACAGCCA-3′，下游引物序列为5′-GGACAAGA-
GCACCGGCAAGGTGAAC-3′。PCR循环条件：95℃预变性3min;95℃、15s，60℃、1min，共45个循环，在C1000TM热循环仪和CFX96TM實时系统(BioGRad，California，USA)中进行扩增反应。最后通过BioRadCFXmanager3.0软件读取基因型。
1.3统计学分析
使用SPSS21.0软件进行统计分析，应用拟合优度χ2检验进行Hardy-Weinberg(HWE)遗传平衡分析，计量资料比较采用Student’st检验，两组间基因型频率及等位基因频率的比较采用Pearson’sχ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1两组一般基础资料比较
病例组和对照组入院孕周、分娩孕周、新生儿体质量和血压比较差异有显著意义(t=-38.603～78.883，P<0.01)，而年龄、月经初潮年龄、孕次和流产次数差异均无统计学意义(P>0.05)。见表1。
2.2两组基因型分布和等位基因频率比较
对照组HSPA1Lrs2227956位点的基因型分布和等位基因频率均符合HWE遗传平衡定律(χ2=2.671，P=0.102)，说明该研究所选取样本具有群体代表性。病例组与对照组相比，基因型分布差异无统计学意义(χ2=0.901，P=0.637)，等位基因频率差异亦无统计学意义(χ2=0.286，P=0.593，OR=0.956，95%CI=0.813～1.126)。见表2。
2.3轻度、重度PE组与对照组基因型分布和等位基因频率的比较
轻度PE病人与对照组、重度PE病人与对照组基因型分布与等位基因频率比较差异均无统计学意义(轻度PE与对照组基因型分布比较，χ2=0.085，P=0.958;等位基因频率比较，χ2=0.090，P=0.764，OR=1.043，95%CI=0.794～1.370。重度PE与对照组基因型分布比较，χ2=1.495，P=0.474;等位基因频率比较，χ2=0.613，P=0.434，OR=0.932，95%CI=0.781～1.112)。见表2。, http://www.100md.com(李胜军 林岩 宗金宝 刘世国 宋卫青)
方法采用TaqMan探针实时荧光PCR技术，对山东地区汉族女性中800例子痫前期(PE)病人和1000例正常妊娠孕妇的外周血DNA进行扩增，比较两组HSPA1Lrs2227956位点基因型分布和等位基因频率。
结果PE组和正常孕妇组HSPA1Lrs2227956位点的基因型分布和等位基因频率比较差异无统计学意义(P>0.05)。与正常孕妇组比较，轻度PE组、重度PE组以及早发型PE、晚发型PE组HSPA1Lrs2227956位点的基因型分布和等位基因频率差异均无显著性(P>0.05)。
结论HSPA1Lrs2227956位点多态性与PE的遗传易感性没有相关性。
[关键词]先兆子痫;HSPA1L基因;多态性，单核苷酸;疾病遗传易感性
[中图分类号]R714.24;R363.25
[文献标志码]A
[文章编号]2096-5532(2020)01-0026-04
子痫前期(PE)是一种妊娠期特发性疾病，可以伴有多种脏器的功能损害[1]，其发病率在初产妇为3.0%～7.0%，经产妇为0.8%～5.0%，严重威胁着母儿的生命健康[2]。PE的发病机制至今尚未完全阐明，但研究表明其发病与炎症反应、氧化应激、免疫失衡、遗传因素等有关[3-8]。系统性炎症反应和氧化应激状态会诱导热休克蛋白70(HSP70)表达升高[9]。并且，PE病人血清、血浆以及胎盘组织中都有高水平的HSP70表达[10]。已有研究证实，多种基因的单核苷酸多态性(SNPs)与PE发病及遗传易感性具有密切关系[11-12]。本研究选取HSP基因中一个标签位点rs2227956，探讨其多态性与PE遗传易感性的相关性，旨在为PE的临床诊断及治疗提供遗传学依据。现将结果报告如下。
1资料与方法
1.1一般资料
选取800例已经确诊的PE病人作为病例组，1000例足月分娩的正常孕妇作为对照组，两组年龄匹配，且均来源于2016年10月—2018年10月在青岛大学附属医院、烟台毓璜顶医院、滨州医学院附属医院、聊城市人民医院、临沂市人民医院、枣庄市妇幼保健院、菏泽市立医院等山东各地医院产科住院的中国汉族妊娠妇女。PE的诊断标准参照美国“国家高血压教育计划”[13]，分度及分型参考相关文献标准[14-15]。其中轻度PE病人181例，重度PE病人619例;早发型PE病人426例，晚发型PE病人374例。对照组为没有PE病史、足月分娩、产后随访亦未发生PE的正常孕妇。两组孕妇均排除前置胎盘、胎膜早破、先兆流产、辅助生殖、巨大儿及双胎妊娠，均无慢性高血压、心脏病、肾病、糖尿病、甲状腺疾病以及系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎等全身性疾病病史。
两组孕妇临床资料均完整，包括年龄、月经初潮年龄、妊娠次数、流产次数、收缩压、舒张压、入院孕周、分娩孕周、临床症状以及实验室检查指标等，且所有研究对象均签署知情同意书。本研究获青岛大学附属医院伦理委员会批准。
1.2研究方法
采集研究对象外周肘静脉血2mL于EDTA抗凝管中，用试剂盒提取基因组DNA，然后采用TaqMan探针实时荧光PCR技术对HSPA1L基因rs2227956位点多态性进行检测。PCR反应体系包括：20×SNP探针1.25μL，2×PCRMasterMix12.5μL，模板DNA和去除DNA酶水11.25μL，总反应体系共25μL。实验所用探针、引物及MasterMix均购买于美国ABI公司。其中rs2227956位点上游引物序列为5′-AATGGTATTCTCAATGTC-ACAGCCA-3′，下游引物序列为5′-GGACAAGA-
GCACCGGCAAGGTGAAC-3′。PCR循环条件：95℃预变性3min;95℃、15s，60℃、1min，共45个循环，在C1000TM热循环仪和CFX96TM實时系统(BioGRad，California，USA)中进行扩增反应。最后通过BioRadCFXmanager3.0软件读取基因型。
1.3统计学分析
使用SPSS21.0软件进行统计分析，应用拟合优度χ2检验进行Hardy-Weinberg(HWE)遗传平衡分析，计量资料比较采用Student’st检验，两组间基因型频率及等位基因频率的比较采用Pearson’sχ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1两组一般基础资料比较
病例组和对照组入院孕周、分娩孕周、新生儿体质量和血压比较差异有显著意义(t=-38.603～78.883，P<0.01)，而年龄、月经初潮年龄、孕次和流产次数差异均无统计学意义(P>0.05)。见表1。
2.2两组基因型分布和等位基因频率比较
对照组HSPA1Lrs2227956位点的基因型分布和等位基因频率均符合HWE遗传平衡定律(χ2=2.671，P=0.102)，说明该研究所选取样本具有群体代表性。病例组与对照组相比，基因型分布差异无统计学意义(χ2=0.901，P=0.637)，等位基因频率差异亦无统计学意义(χ2=0.286，P=0.593，OR=0.956，95%CI=0.813～1.126)。见表2。
2.3轻度、重度PE组与对照组基因型分布和等位基因频率的比较
轻度PE病人与对照组、重度PE病人与对照组基因型分布与等位基因频率比较差异均无统计学意义(轻度PE与对照组基因型分布比较，χ2=0.085，P=0.958;等位基因频率比较，χ2=0.090，P=0.764，OR=1.043，95%CI=0.794～1.370。重度PE与对照组基因型分布比较，χ2=1.495，P=0.474;等位基因频率比较，χ2=0.613，P=0.434，OR=0.932，95%CI=0.781～1.112)。见表2。, http://www.100md.com(李胜军 林岩 宗金宝 刘世国 宋卫青)
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